تشخیص وجود مشتقات خوکی در نمونه‌های گوشت و غذاهای بسیار فرآوری شده مشکوک با استفاده از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز زمان واقعی

نویسندگان
1 دانشجوی دکتری شیمی مواد غذایی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان
2 عضو هیئت علمی و معاون تحصیلات تکمیلی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان
3 عضو هیات علمی بخش پزشکی مولکولی مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی انیستیتو پاستور ایزان
4 عضو هیات علمی گروه صنایع غذایی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان
چکیده
چکیده

تشخیص وجود اجزای خوکی در فرآورده‌های غذایی دیگر به ویژه در کشورهای اسلامی و در غذاهای حلال اهمیت زیادی دارد. در این تحقیق از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز زمان واقعی بر مبنای سایبرگرین جهت تشخیص DNA خوک در گوشت و مشتقات بسیار فراوری شده خوک مانند ژلاتین و محصولات حاوی ژلاتین استفاده شد. این روش از پرایمرهای جدید اختصاصی که توسط نرم افزار AlleleID7 طراحی شده‌اند را بکار می‌برد که قطعه‌ای 114 جفت بازی از ناحیه D-loop میتوکندری خوک را تکثیر می‌کند. پس از بهینه‌سازی ترکیب مخلوط و برنامه دمایی جهت حداکثر فلوروسانس و حداقل چرخه آستانه، منحنی استاندارد سری رقت تهیه شده از DNA استخراج شده از گوشت خوک، توان تشخیص رقت 001/0 در مقایسه با DNA اولیه را با کارایی 92% نشان داد. اختصاصی بودن روش با آزمایش DNA استخراج شده از گوسفند، گاو، مرغ و ماهی ارزیابی شده و هیچ گونه تکثیری در نمونه‌های کنترل منفی دیده نشد. جهت ارزیابی این روش در تشخیص مشتقات خوکی در غذاهای بسیار فرآوری شده چند نمونه پودر و ورق ژلاتین انتخاب شدند و روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز زمان واقعی بر مبنای سایبرگرین در تشخیص تمام آنها موفق بود.
کلیدواژه‌ها

موضوعات