معتبرسازی روش جهت اندازه گیری آفلاتوکسین M1 در پنیر سفید ایرانی با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کار آیی بالا و تخلیص با ستون های ایمونوافینیتی

چکیده
چکیده

آفلاتوکسین M1حاصل متابولیت ثانویه آفلاتوکسین B1در بدن نشخوارکنندگان می باشد . آفلاتوکسین B1توسط غذای آلوده به بدن حیوان راه یافته و بعد از متابولیزه شدن به آفلاتوکسین M1 تبدیل می گردد.این سم در شیر به عنوان مهمترین آلاینده باقی می ماند . جهت بررسی نحوه توزیع آفلاتوکسین M1 در مشتقات شیر مانند پنیر سفید ایرانی از آنجا که روش معتبری برای پایش آن وجود نداشت ، نیاز به اعتبار بخشی به روش آزمون اندازه گیری آفلاتوکسین M1 در پنیر احساس شد و به دنبال آن برای اولین بار روش ارائه شده در مقاله برای پنیر سفید ایرانی ، معتبرسازی کامل شد.به این منظور ابتدا سم از نمونه توسط یک حلال قطبی ( دی کلرومتان) استخراج و سپس عصاره استخراجی خشک و عصاره خشک شده در مخلوطی از هگزان ، متانول و آب ،حل و پس از جداسازی فاز آبی توسط ستون ایمونوافینیتی تخلیص گردید . عصاره تخلیص شده در دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تشخیص و تعیین مقدار گردید.جهت معتبرسازی روش آزمون فاکتورهای صحت ، دقت ،حساسیت روش با احتساب 2 کمیت حد تشخیص و حد تعیین به منظور مناسب بودن برای اندازه گیری در مقادیر به دست آمده، مدنظر بوده است . اندازه گیری صحت با غنی سازی نمونه های شاهد فاقد آلودگی انجام گرفت . به این منظور با احتساب وزن نمونه و غلظت سم استاندارد و سطح آلودگی مورد نظر ، حجم استاندارد لازم محاسبه و به نمونه شاهد اضافه گردید. نمونه های آلوده شده به همراه نمونه شاهد در شرایط تعریف شده در تکرار پذیری، مورد آزمون قرار گرفت. برای اندازه گیری دقت، روش آزمون در 6 روز کاری تحت شرایط تکرار پذیری انجام و با محاسبه میانگین ، واریانس ، انحراف معیار و نهایتا انحراف معیار نسبی استاندارد (RSD)،مورد ا رزیابی قرار گرفت .حد تشخیص روش یعنی کمترین غلظت قابل اندازه گیری در این روش ppt55 و حد تعیین مقدار ppt183 به صورت عملی محاسبه گردیده است. با توجه به انجام مراحل معتبر سازی اندازه گیری آفلاتوکسین M1در پنیر در آزمایشگاه می توان این روش را یک روش مطمئن برای اندازه گیری این سم در پنیر سفید ایرا نی دانست.
کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله English

Method Validation of Aflatoxin M1 in Iranian White Cheese by High Performance Liquid Chromatography and Immunoaffinity Columns

چکیده English

Aflatoxin M­1 is a result fungal secondary metabolite in ruminants .this toxin remains in milk as one the most important contaminants. In this work we modified the methods described by other researchers and presented it as a validated method for monitoring aflatoxin M1 in Iranian white cheese for the first time. At first, toxin was extracted from a polar solution (dichloromethane) and then the extract was dried and dissolved in hexan, methanol and water solution .in the third step water phase separated and purified using immunoaffinity liquid chromatography .for method validation we calculated accuracy, precision and sensitivity factors. Measurement of accuracy of method was performed by fortification of conventional blank samples. For precision measurement method was evaluated in six working days under repeatability condition and calculated the mean, variance and relative standard deviation (RSD). Limit of detection in our method was 55 ppt and limit of quantification was 183 ppt.

کلیدواژه‌ها English

Aflatoxin M1
Cheese
validation
High performance liquid chromatography (HPLC)