شناسایی ژنتیکی مخمرهای مقاوم به سیکلوهگزامید جداسازی شده از محصولات لبنی سنتی فاطمه نجاتی 1، جوانا فلیس2، مهدی بابایی3، فابیو فراچتی2، مارتا تبالدی2، ساندرا توریانی2، اشکان تاج‌بخش4، وحید براتی4، سیروس جلیل4

چکیده
چکیده محصولات لبنی تولید شده به روش‌های سنتی دارای فلور میکروبی بسیار پیچیده‌ای شامل میکروارگانیسم‌های همچون باکتری‌های اسید لاکتیک و مخمرها هستند. روش رایج برای برای شناسایی باکتری‌های اسید لاکتیک عبارت است از کشت دادن آنها در محیط کشت‌هایی حاوی آنتی‌بیوتیک سیکلوهگزامید، که با مهار سنتز پروتئین از رشد مخمرها جلوگیری می‌کند. با این حال، برخی از مخمرها مقاومت طبیعی و یا اکتسابی به این آنتی‌بیوتیک نشان داده و و بنابراین به صورت انتخابی بر روی محیط رشد می‌کنند. در این تحقیق تلاش شد تا این گروه از مخمرها از محصولات لبنی جداسازی و شناسایی شوند. بدین منظور 25 نمونه محصول لبنی تولید شده به صورت سنتی در محیط کشت‌ ام.آر.اس حاوی 01/0 درصد سیکلوهگزامید کشت داده و پس از گرمخانه‌گذاری 48 (ساعت در ˚C30)، 32 کلونی که از لحاظ ظاهری به مخمرها شباهت داشتند برداشته شدند. انجام تست کاتالاز و بررسی‌های میکروسکوپی نشان‌دهنده‌ی حضور 19 مخمر درمیان 32 جدایه بود. پس از استخراج DNA ژنومی از هر جدایه، PCR به منظور تکثیر تصادفی قطعات DNA(RAPD-PCR) با استفاده از آغازگر M13 انجام شد تا اطلاعاتی درمورد خویشاوندی ژنتیکی میان جدایه‌ها بدست آید. مقایسه چشمی الگوهای باندی RAPD-PCR بدست آمده منجر به انتخاب 5 مخمر به عنوان نماینده برای شناسایی بیشتر شد. در ادامه، آغازگرهای IST1 و IST4 برای تکثیر اختصاصی استفاده شدند و محصولات PCR پس از خالص‌سازی مورد آنالیز توالی‌یابی قرار گرفتند. نتایج توالی‌یابی نشان داد که همگی مخمرهای جدا شده به گونه کلایورومایسس مارکسیانوس تعلق دارند که گونه‌ای با توانایی تکنولوژیکی بالا است.
کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله English

Genetic identification of cycloheximide-resistant yeasts isolated from traditional dairy products Nejati, F. 1, Felis, G. 2, Babaei, M. 3, Fracchetti, F. 2, Tebaldi, M. 2, Torriani, S. 2, Tajbakhsh, A. 4, Barati, V. 4, Jalil, S. 4

چکیده English

Traditional dairy products harbor a complex microbiota composed by several microbial groups, including lactic acid bacteria (LAB) and yeasts. The common method to detect LAB is to culture the products on media containing cycloheximide (CHX) to prevent yeast growth by interfering with protein synthesis. However, some yeast species and strains show natural or acquired resistance to this antibiotic and thus can be specifically selected in media with CHX. The aim of this research was to identify such CHX-resistant yeasts. To this purpose, 25 samples of home-made dairy products were plated on MRS medium with 0.01% CHX; after incubation (48 h, 30˚C), 32 colonies of presumptive yeasts were picked up. Catalase test and morphological investigation confirmed that 19 were yeasts. After DNA isolation, randomly amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction (RAPD-PCR) with primer M13 was applied to gain information on genomic relatedness among isolates. Visual comparison of RAPD-PCR pattern allowed selecting five representative isolates for further analysis. Primers ITS1 and ITS4 were used for specific amplification, and the PCR-products were sequenced after purification. The results of sequencing revealed that all isolates belong to Kluyveromyces marxianus, a species with a high technological potential.

کلیدواژه‌ها English

Key words: Traditional dairy products
Cycloheximide-resistant yeasts
Genetic identification
Kluyveromyces marxianus