دوره 15، شماره 81 - ( 1397 )                   جلد 15 شماره 81 صفحات 412-399 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Mohebzadeh S, Asghari R, Fathi Achachlouei B. Optimization of calf rennin gene and construction of gene construct for the recombinant chymosin production in Pichia pastoris. FSCT 2018; 15 (81) :399-412
URL: http://fsct.modares.ac.ir/article-7-15639-fa.html
محب زاده سهیلا، زارع ناصر، اصغری ذکریا رسول، فتحی آچاچلویی بهرام. بهینه سازی توالی ژن رنین گاوی و تهیه سازه ژنی مناسب برای تولید کیموزین در مخمر Pichia pastoris. مجله علوم و صنایع غذایی ایران. 1397; 15 (81) :399-412

URL: http://fsct.modares.ac.ir/article-7-15639-fa.html

بهینه سازی توالی ژن رنین گاوی و تهیه سازه ژنی مناسب برای تولید کیموزین در مخمر Pichia pastoris
سهیلا محب زاده1 ، ناصر زارع2، رسول اصغری ذکریا3 ، بهرام فتحی آچاچلویی4
1- گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی
2- عضو هیات علمی- دانشگاه محقق اردبیلی
3- عضو هیات علمی گروه زراعت و اصلاح نباتات کشاورزی، دانشگاه محقق اردبیلی
4- گروه صنایع غذایی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی
چکیده:   (5890 مشاهده)
کیموزین حیوانی بـه عنـوان موثرترین آنزیم برای تولید پنیر مطرح است که این امر به دلیل کیفیت بسیار مناسب بافت و عطر و طعم پنیر تولید شده می‌باشد. با توجه به تقاضای روز افزون نسبت به این آنزیم نیاز است در کنار سایر منابع گیاهی و میکروبی از منابع نوترکیب نیز برای تولید این آنزیم استفاده گردد. در این پژوهش به منظور تولید نوترکیب کیموزین، و نیز بهبود بیان ژن کیموزین گاوی در مخمر، ابتدا توالی ژن کیموزین بر اساس کاربرد کدونی (Codon usage) مخمر پیچیا پاستوریس بهینه‌سازی و سنتز گردید. پس از بهینه‌سازی توالی نوکلئوتیدی، شاخص انطباق کدونی (CAI) از 59/0 به 72/0 افزایش پیدا کرد در حالی‌که، توالی ژنی 83% با توالی بهینه شده مطابقت داشت. تعداد کدون‌های نادر با فراوانی کم‌تر از 10% قبل از بهینه‌سازی 41 عدد بود که پس از بهینه‌سازی هیچ کدونی با فراوانی کم‌تر از 10% یافت نشد. به منظور انتقال ژن کیموزین A به وکتور بیانی pPIC9 مخمری، ژن سنتز شده کیموزین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور PTG-19 همسانه‌سازی گردید. کلونی‏های نوترکیب از طریق روش غربالگری کلونی‌های سفید-آبی گزینش شدند. ژن کیموزین با استفاده از آنزیم‌های Not I و EcoR I از وکتور PTG19-chymA برش داده شده و در وکتور pPIC9 برش یافته با همان آنزیم‌ها همسانه گردید. کلونی‌های نوترکیب pPIC9-chymA با استفاده از تکنیک کلونی ‌PCR شناسایی و انتخاب شدند. ماهیت نوترکیبی و درج صحیح ژن کیموزین در وکتور بیانی مخمری pPIC9 از طریق استخراج پلاسمید و برش با آنزیم برشی BamH I مورد تایید قرار گرفت.
واژه‌های کلیدی: کیموزین نوترکیب، همسانه‌سازی ژن، آنزیم لخته‌کننده شیر
متن کامل [PDF 1246 kb]   (2753 دریافت)    
نوع مقاله: علمی پژوهشی | موضوع مقاله: کنترل کیفیت مواد غذایی
دریافت: 1396/10/11 | پذیرش: 1397/6/5 | انتشار: 1397/8/24
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.